在上期中，我们讨论了细胞转染的应用及其基本分类。本期将继续为大家介绍与病毒转染相关的技术。病毒转染是一种高效的细胞转染方法，通过病毒载体将外源基因包裹在病毒外壳中，借助病毒的自然感染性将外源基因导入宿主细胞，确保其在细胞内的稳定表达。根据不同的病毒载体，病毒转染主要分为腺病毒、慢病毒、逆转录病毒和腺相关病毒。其中，慢病毒因其高效性和广泛应用而受到实验室的青睐，接下来我们将重点讲解慢病毒的相关知识。

一、慢病毒的结构

慢病毒以HIV-1为基础开发，属于有包膜的RNA病毒，直径为80-120nm，呈二十面体对称球形。其结构最外层为包膜，内部依次为基质蛋白和衣壳，最中心是两条相同的正股RNA链以及一些关键酶，如逆转录酶和整合酶等。慢病毒的基因组较为复杂，以HIV-1为例，共包含九个基因，并具备两端的反向末端重复序列(LTR)和多个编码结构基因及调节基因。随着研究的深入，慢病毒基因组经过编辑，衍生出第一代、第二代及第三代慢病毒系统，其中第二代和第三代的质粒系统是当前最常用的。

二、慢病毒的复制与包装

为了提高靶细胞的转染效率，必须先进行高滴度的慢病毒复制与包装。通常，我们将三种质粒按照一定比例转染到293T细胞中，经过48-72小时孵育后收集含有病毒的上清液，或进一步浓缩病毒。

三、慢病毒感染细胞的过程

慢病毒感染细胞的首要步骤是通过其表面的包膜蛋白与宿主细胞表面的受体结合。当病毒与细胞膜融合后，病毒内部的结构蛋白和酶会被释放出来。在逆转录酶的参与下，慢病毒RNA完成逆转录，并与整合酶形成整合前复合物。当该复合物进入宿主细胞核后，整合酶会将其整合到宿主基因组中，外源基因则在宿主细胞质中得到表达。

四、慢病毒转染的常见类型

1. 慢病毒荧光转染：通过转染标记荧光蛋白（如GFP、mCherry、RFP等），最终筛选出带有荧光蛋白的目标细胞。这类细胞在受到荧光激发后，能够发射特定波长的光，从而验证转染效率。

2. 慢病毒Luciferase化学发光转染：将包含荧光素酶编码基因的质粒转染入细胞后，产生荧光素酶，在特定底物的作用下生成可被检测的荧光。这一技术能够有效地监测活体动物体内肿瘤生长和转移的过程。

3. 慢病毒细胞永生化转染：通过病毒感染、辐射或化学处理等手段打破原代细胞的分裂限制，使其获得无限增殖能力。借助慢病毒转染技术可将外源性永生化基因导入目标细胞，获得稳定的永生化细胞株。

人生就是博致力于为细胞系和原代细胞的慢病毒转染提供专业服务，我们的服务范围包括转染绿色荧光蛋白（ZsGreen）、红色荧光蛋白（mCherry、RFP）、化学发光LUC和SV40永生化等，总计近40种稳定转染的细胞系，欢迎与我们联系进行定制服务。

产品推荐及实验周期：

• SNTS-L001：GFP稳转，3-4周
• SNTS-L002：RFP稳转，3-4周
• SNTS-L003：mCherry稳转，3-4周
• SNTS-L004：LUC稳转，3-4周
• SNTS-L005：SV40永生，6-8周

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