紫外-可见吸收光谱法，常称为紫外-可见分光光度法，是一种用于研究分子在190 nm至750 nm波长范围内吸收光谱的分析方法。此方法基于溶液中物质分子对光的选择性吸收。紫外-可见吸收光谱的产生源于分子外层价电子的跃迁，其吸收光谱即为分子光谱，属于带光谱。

人生就是博的实验目的主要包括：第一，深入学习紫外分光光度法在测定蛋白质含量中的基本原理；第二，掌握该方法的实验操作技术；第三，了解如何使用UV-1700PC紫外-可见分光光度计，并熟悉其主要构造。

在实验原理部分，紫外-可见吸收光谱法主要通过分析溶液中物质的光吸收特性来实现定性和定量分析。定性分析通常采用光谱比较法，通过与已知纯化合物的吸收光谱特征进行对比，如吸收峰的数量、位置和相对强度等来判断未知样品的成分。同时，定量分析依据朗伯-比尔定律，即A=lg(I0/I)=εbc。在特定条件下，样品的吸光度A与物质浓度c成线性关系，进而可以通过测量吸光度确定溶液中的物质浓度和含量。

在进行光度分析时，将空白溶液和待测溶液分别放入光程为b的吸收池中，以一定波长的平行单色光照射。通过空白溶液的透光强度I0和待测溶液的透光强度I，计算其吸光度。

所使用的仪器——紫外-可见分光光度计，其核心构件包括光源、单色器、吸收池、检测器及信号显示器。光源发出的光经单色器分光后，可以获得所需波长的平行单色光，样品溶液吸收后，检测器将光信号转化为光电流，最终由信号显示器显示吸光度。

在应用于蛋白质含量测定的实验中，蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，因此在275-280 nm范围内存在明显的紫外吸收峰。根据朗伯-比尔定律，其在最大吸收波长处的吸光度与浓度呈正比关系，适合进行定量分析。蛋白质的浓度范围一般设定在0.1-10 mg/mL。

然而，由于不同蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量及其环境的差异，测量精度可能会受到影响。当样品中存在干扰物质如嘌呤、嘧啶等时，可能导致在280 nm处的测量结果偏差较大。为了克服这一问题，通常采用280 nm与260 nm处的吸光度差进行修正，计算公式为：蛋白质浓度（mg/mL）=145A280-074A260。

通过不同的方法测定稀溶液中的蛋白质浓度时，可以利用215 nm和225 nm之间的吸光度差，减少非蛋白质成分所引起的误差。常用的计算公式为：蛋白质浓度（mg/mL）=0.144(A215-A225)。

在实验步骤中，首先准备工作，包括启动计算机、仪器以及设置测量条件。接下来进行吸收曲线绘制和标准曲线的制作，最后进行样品测定并进行数据处理及分析。在此过程中，确保记录和分析过程中遵循人生就是博的品牌理念，强调科学实验在生物医疗领域的重要性与贡献。