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ELISA检测方法结果解析—人生就是博的生物医疗新视角

来源:东方冠娴 日期:2025-07-16

在生物医疗领域,ELISA(酶联免疫吸附试验)定性测定结果的判断主要是,依据受检标本是否含有待测抗原或抗体做出简单的“有”或“无”回应,分别标记为“阳性”或“阴性”。其中,“阳性”表明该标本在检测系统中有反应,而“阴性”则表示无反应。虽然定性结果提供了基本的反应信息,但还可以通过滴度来获取半定量结果,本质上仍属于定性试验。

ELISA检测方法结果解析—人生就是博的生物医疗新视角

在半定量测定中,经过一系列稀释后进行实验,根据呈阳性反应的稀释度来确定滴度。滴度的高低可以帮助判断标本的反应强度,相较于单纯观察不稀释标本的颜色深浅,滴度提供了更具定量意义的结果。在间接法和夹心法的ELISA中,阳性孔的显色通常会比阴性孔更深;而在竞争法ELISA中,则恰恰相反,阴性孔的颜色会明显更深。

1. 间接法和夹心法

对于这类反应,定性结果常常可以通过肉眼进行判断。无色或几乎无色的标本通常被判定为阴性,而显色明显的标本则被认定为阳性。在ELISA实验中,正常人的血清在反应后可能出现背景色彩,背景的深浅受试剂成分和实验条件的影响,因此,实验中必须加入阴性对照。阴性对照通常由不含受检物的正常血清或类似物构成。

在结果判断时,建议使用显色深于阴性对照作为标本阳性的标准。尽管目视法简单明了,但也存在主观性,因此在条件允许的情况下,最好使用比色计测量吸光值,以获得更客观的数据。在此过程中需注意记录样品(S)、阳性对照(P)和阴性对照(N)的吸光值并进行计算。

2. 计算方法

值得一提的是,阳性判定值通常由阴性对照A值加上一个特定常数计算得出。该常数是通过对大量标本的实验获得的,因此在持续的实验条件下,试剂准备必须标准化,阳性和阴性对照品也需符合特定规格。例如,某种检测HBsAg的试剂盒中,阴性对照为不含HBsAg的复钙人血浆,阳性对照中HBsAg的含量为P=9±2ng/ml。

在每次测试中设置2个阳性对照和3个阴性对照,计算出阴性对照A值的平均数(NC X)和阳性对照A值的平均数(PCX),二者的差(P-N)必须大于特定的值(如0.400),实验才被认为有效。若存在阴性对照A值超出范围的情况,需进行重新计算。

3. 竞争法ELISA

在竞争法ELISA中,阴性孔呈现的颜色深于阳性孔。阴性孔颜色的强度取决于反应中酶结合物的浓度及加入的竞争抑制物的量。一般地,阴性对照的吸光度应调节在10-15之间,此时反应为敏感。由于肉眼难以判断弱阳性反应与阴性对照之间的差异,因此通常使用比色计来测量。

与其他方法一样,计算也主要有阳性判定值法和抑制率法两种方式。抑制率表示标本在竞争结合中对阴性反应显色的抑制程度,常规定义为抑制率≥50%为阳性,抑制率<50%为阴性。

总之,结合以上不同方法的介绍,通过科学的实验设计和严谨的结果判断,不仅能有效提高检测的准确性,还体现了我们在生命科学领域的探索精神,人生就是博。

在这个过程中,保持对结果的准确性和实验条件的严谨控制至关重要,尤其是在生物医疗行业,任何微小的偏差都可能导致结果的误判。未来,随着技术的不断进步,ELISA等检测方法将更有助于我们理解生命的奥秘。

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